Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС)

Репродуктивный и респираторный синдром свиней (РРСС, «синее ухо, голубой аборт», эпизоотический поздний аборт свиней) -это вирусное контагиозное заболевание главным обра­зом свиноматок, характеризующееся абортами, наличием мертворожденных поросят, преждевременными опоросами или задержкой опороса, респираторными нарушениями, появлением окрашивания кожи ушей и других органов. С 1987 г. во многих свиноводческих хозяйствах США и Канады регистрируется патоло­гия воспроизводства свиней, характеризующаяся поздними абортами, рождением мертвых,нежизнеспособных или уродливых поросят и поражением органов дыхания. РРСС вызывается артеривирусом. Забо­левание появилось в конце 1980-х гг. в Северной Америке, затем в Европе. В настоящее вре­мя РРСС является эндемичным для многих регионов мира. Болезнь отличается большим раз­нообразием признаков,определяемых во многом общим состоянием здоровья животного. При интродукции внеинфицированное стадо инфекция причиняет большой экономический ущерб, но скоро переходит в умеренную или даже инаппарантную форму. В эндемичной форме вирус продолжает долгое время циркулировать в стаде. В течение многих недель персистирует виремия. Вирус предрасположен к макрофагам и не размножается в большинстве клеточных линий, отличается чрезвычайной генетической и АГ-вариабельностью. Первоначально это заболевание получило название «таинственная болезнь свиней» В 1991 г. были опубликованы сообщения о появлении аналогичного заболевания свиней в стра­нах Европы. При этом ученым из Центрального ветеринарного института в Нидерландах был выделен новый вирус, который назвали «вирус Лелейстад». Вирус Лелейстад это РНК-содержащий,оболочечный вирус, отнесен к роду артеривирусов. Для исключения разночтения этой болезни в различных странах мира, сессия МЭБ (апрель 1991 г.) и 2-й Ме­ждународный симпозиум в США (1992 г.)приняли единое название — репродуктивный респи­раторный синдром свиней (РРСС),или PRRS в латинской транскрипции.

Распространение болезни. В настоящее время можно говорить о панзоотии РРСС, хотя многое еще не известно о ее мировом распространении. Многие страны не могут лабораторно диагностировать болезнь или не хотят сообщать о ее появлении. На американском континенте о болезни сообщали США и Канада. В США существуют четкие статистические данные по болезни. Имеются данные о ее наличии в 19 штатах. Моррисони с сотр. сообщили о ретроспективном выявлении 364 стад животных , положительно реаги­рующих на РРСС на основании серологических исследований только в 7-ми свиноводческих штатах (Айова,Иллинойс, Индиана, Мичиган, Небраска и Северная Каролина). В Канаде со­общения подтверждены серологически в 2-х штатах: Онтарио и Квебек. В Европе наибольшее распространение болезни отмечали в свиноводческом поясе, охватываю­щем западные земли Германии, Нидерланды и Бельгию. В Бельгии наибольшее количество вспышек болезни регистрировали в апреле 1991 г. В свиноводческих хозяйствах Франции РРСС — новое заболевание, вызываемое у свиней новым вирусом. Проявляется разнообразной симтоматологией и сопровождается абортами, мертворождением и гибелью поросят, а также гриппоподобными проявлениями. Во Франции РРСС регистрировали на 169 племен­ных фермах в период с ноября 1991 г. по май 1992 г., главным образом, в провинции Бретань. В Англии болезнь появилась в мае 1991 г. и широко распространилась в графствах Хамберсайд и Северном Йоркшире, а в последующем ив Шотландии. Болезнь регистрирова­лась также в Дании, Испании, Голландии и нао. Мальта обнаружены специфиче­ские AT к возбудителю в пробах крови свиней,поступившей в диагностические центры Евро­пы из Италии и Польши.

Сведения о возбудителе. Голландским ученым Wensvoort и Terpstra (Центральный ветеринарного института г Лелистад) удалось установить истинную этиологическую природу этой болезни, выделив вирус, названный ими «агент Лелистад»,в культурах легочных макрофагов свиней. В на­стоящее время установлено, что возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус, ко­торый входит в род артеривирусов.

Морфология и химический состав. Возбудитель болезни -РНК-содержащий вирус раз­мером 45-65 нм. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям. По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода артеривирусов (вирус артериита лошадей). Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332),несколько от­личаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи.

В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2-4 сут. Вирус содержит РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и проходить через плаценту, зара­жая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно иммуносупрессию. Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на фермах. Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и специфических AT у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого приема молозива. Plagemann (1992) предполагает, что вирус РРСС относится к новой груп­пе вирусов, напоминающих тоговирусы, но имеющую положительно закрученную РНК и по структуре сходных с корона- и торовирусами.

Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению рН среды.Оптимум рН от 5 до 7. Benfield et Welson (1992) сообщали, что вирус SIRS,выделенный в США, сохраняет инфекционность в гомогенатах пораженных легких при-70°С в течение 1,5 лет, при +4°С — 1 мес, при 37°С — 2-х сут. При температуре 55°С он инактивируется в течение 45 мин. Friey et.al. (1992) выделили вирус из патматериала, хранившегося в течение 3-х лет в замороженном состоянии.

AT свойства. Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие ATк вирусу РРСС с по­мощью ИФА в течение 12 нед после опороса. Титр AT у свиноматок сопоставляли с титром материнских AT у поросят в возрасте 2 нед.Материнские AT, выявляли у поросят в течение 4-10 нед. ВНА обнаружили через 12 дней после заражения или 18 дней после контакта с больны­ми животными. Максимальных титров они достигали на 40-50-е сутки после заражения и сохранялись до 120 дней (срок наблюдений).

Культивирование. Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных макрофагах (АМФ) поросят. Для получения АМФ используют 4-6-нед поросят, свободных от патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пеницил­лин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью автоматического шприца с иглой (около 500 мл). Выбор жидкости из легких, содержащей АМФ, проводят обычно шприцами через то же отверстие. Суспензию клеток из легких цен­трифугировали при 1500 обор. — 15 мин. При наличии эритроцитов к осадку добавляли 0,83%-ный р-р хлорида аммония и после 5-мин инкубации при комнатной температуре клетки вновь центрифугируют при тех же условиях. Заражение вирусом РРСС проводили через 2-24 ч по­сле 2-кратной отмывки питательной средой и антибиотиками. Учет цитотоксического дейст­вия вируса проводят через 24, 48, 72, 96 и 120 ч. Культуральную жидкость используют в ка­честве AT ELISA. Титр макрофагального вируса составлял 1:8-1:16. Таким образом, АМФ могут быть использованы для препаративной наработки вируса в исследовательских целях, изготовления диагностикумов и обнаружения вируса в патологических материалах.Чувствительными к вирусу РРСС являются первичная культура АМФ свиней и клон клеток MARC-145 (клоновый вариант, полученный из переви­ваемой культуры клеток МА-104 почки африканской зеленой мартышки). Максимальное на­копление вируса отмечали при посевной концентрации 100-120 тыс. клеток/1 мл с использо­ванием фетальной сыворотки и снятия мо­нослоя не позднее 3-4-х сут.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. У свиноматок болезнь начинается с временного отказа от корма или худшей его поедаемости. В период абортов от­мечают как повышенную до 41,5°С, так и пониженную температуру тела. У отдельных жи­вотных наблюдают респираторные нарушения и у 1-5% — голубовато-красное окрашивание кожи ушей, пятачка и вульвы. Существенным признаком заболевания супоросных свиноматок периода,близкого к опоросу, являются аборты и преждевременные опоросы, возникающие через 2-3 нед после обнаружения первых симптомов болезни. По данным английских ученых, пораженные свиньи на первой стадии болезни проявляют признаки инфлюэнцы, в частности, высокую температуру тела и тяжелое дыхание. Позднее ярко-красные пятна появляются по всему телу свиньи. Спустя некоторое время окраска пятен изменяется, и они приобретают си­ний цвет. В первые 2 нед болезни аборты могут составлять 60-70%, через 3 нед — 50 и через 18 нед — 10%. В естественных условиях клиника может значительно варьировать от стада к стаду и не коррелировать с основной тяжестью репродуктивных нарушений. В от­дельных хозяйствах количество абортировавших свиней на последней стадии супоросности достигает 100%.

При анализе 214 пораженных хозяйств в округе Мюнстерленд в Германии установлено, что 37% абортов произошло на 100-112 дни, 49% -на 113 дни 14% — на 117-120 дни супорос­ности. Если рассматривать крайние пределы нормальной супоросности в 113-117 дней, то запоздалые опоросы до 120 дней могут свидетельствовать о гибели плодов в более раннем пе­риоде,обусловленных другими инфекциями свиней с репродуктивным синдромом, такими как парвовирусная или энтеровирусная. Однако, как правило, мумификации плодов при ост­ром течении РРСС не наблюдается. В отдельных случаях у свиноматок наблюдали залежива­ние, шаткую походку, паралич задних конечностей или косую постановку головы. Гибель свиноматок не превышает 2%. После абортов свиноматки довольно быстро выздоравливают и только у отдельных из них отмечали «послеродовые схватки». Свиноматки повторно приходят в охоту, однако сообщается об удлиненном сроке холостого периода. У свиноматок, опоро­сившихся в оптимальные сроки супоросности (114,7±1,7 дн) в остром периоде болезни до 100% поросят могут быть мертворожденными Немецкие авторы, обработав большое количество статистических показателей поражен­ных хозяйств, установили, что от больных свиноматок в пометах насчитывали 30-40% мер­творожденных, 30% слабых и 30% внешне здоровых поросят. У мертворожденных поросят наблюдали выпуклообразную форму головы, конъюнктивиты и поражение роговицы глаз, подкожные отеки. Слабые поросята массой до 1 кг издают ужасающий визг и стенания, задние конечности их часто вытянутые, и они не могут нормально встать на ноги. При хроническом течении наблюдают относительное благополучие супоросных маток. Спустя 1-1,5 месяца возможно рождение на неблагополучной ферме здоровых поросят, но через некото­рое время вновь отмечают аборты. В откормочных хозяйствах болезнь протекает с рядом особенностей: основные клинические признаки связаны с поражением органов дыхания.

При вскрытии наблюдают кровоизлияния и отеки подкожной клетчатки, увеличенное со­держание жидкости в перикардиальной и брюшной полостях, дистрофию печени и изменения в легких. Они кровенаполнены и чаще имеют мозаичную окраску. Слаборазвитые поросята, как правило, гибнут в первые недели жизни. Через 4-6 нед заболевание начинает приобретает хроническое течение; наблюдается задержка роста и развития, а также повышенная чувстви­тельность к секундарным инфекциям. У отдельных животных отмечали негнойные энцефали­ты и миокардиты. Правда, у большинства поросят их не обнаруживали. В целом патолого анатомические признаки не характерны и напоминают таковые при бактериальных инфекциях. У маток с поражением ушей признаков миокардита не отмечали. У больных животных в США процент поражения сердечной мышцы значительно выше, чем в Германии. Нередко болезнь протекала в смешанной форме,одновременно с гриппом, БА, парвовирусной инфекцией.

Экспериментальная инфекция. Terpstra и др.. (1991) проводили опыты по заражению культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности. Только у 2-х свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х — покраснение ко­жи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дней супоросности и принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и 117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из которых 5 были мумифицированными Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113-115-и дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из ко­торых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни Вирус РРСС был выделен от 31 поросенка (30% инфицированности). При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2-5-е сут у инфицированных подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5-1,5°С) повышение температуры тела.У 2-х животных на 10-12-й день после заражения отмечен кашель. Других клинических признаков болезни не выявлено. Повышение количества лейкоцитов в крови было установлено через су­тки после заражения животных и к 4-му дню их уровень достигал 28-30 тыс/мл и сохранялся в течение 2-3 нед. У подсвинка,находившегося в контакте с зараженными животными, по­вышение температуры тела отмечено на 18-19-е, а увеличение числа лейкоцитов на 6-е сутки после совместного содержания. На 5 и 14 день после заражения было убито по одному животному. При патологоанатомическом исследовании у них отмечали единичные очажки острой бронхопневмонии. В обоих случаях из легких и легочных альвеолярных макрофагов выделен вирус РРСС. В остальных внутренних органах подопытных животных видимых из­менений не обнаружено. При интраназальном заражении вирус содержащей суспензией поросят 4-нед возраста температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн, отмечалось учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение Подкожное и внутримышечное введе­ние вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей на­ступала через 24 ч Вирус № 9-181-93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфи­ческое ЦПД. В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС, кото­рый не вызывал ГА эритроцитов и Гад. У животных, зараженных европейским стандартным шт «Лелистад» вируса РРСС клинических признаков не отмечалось.

Эпизоотологическая характеристика. С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции. В частности, в де­кабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране — одно из наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась респираторным путём, весьма возможно, в потоках воздуха. Предположительно,факторами передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили(если эти объекты были в контакте с инфекционным агентом).

Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в 1991 г в Великобритании были запрещены. По данным госветслужбы этой страны в настоя­щее время нет доказательств распространения болезни воздушным путём, и все случаи заноса возбудителя связаны с передвижением поросят. Вирус может персистировать в заражённых стадах свиней до полугода. Это может быть связано с отсутствием сероконверсии у отдельных явно инфицированных животных. Отдельные заражённые свиноматки могут быть источником заражения для здоровых животных в течение 99 дней. Английские исследо­ватели считают, что стада свиней остаются заражёнными в течение 2-х месяцев после прекраще­ния появления явных клинических признаков болезни. Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС пле­менных ферм свиней. На небольших фермах на 50-200 свиноматок в период острого течения болезни недополучают более 50% поросят.

В нашей стране в 1991-1993 гг. в ряде хозяйств обнаружены массовые случаи абортов, рождение мёртвых и слабых поросят, респираторные расстройства. В 1993 г.в Голландию были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной функции из 10 хозяйств для исследования на наличие AT к вирусу репродуктивного и респи­раторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реаги­рующие свиноматки. Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положитель­ными, причем большая часть сывороток(72,5%) содержала специфические AT в высоких титрах (1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широ­кой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах. Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими ис­следователями установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их функции уинфицированных поросят. Макрофаги играют важную роль в индукции AT обра­зования- они передают агент Т- и В-лимфоцитам. Развитие респираторного синдрома,по-видимому, обусловлено вторичными бактериальными инфекциями после размножения вируса в альвеолярных макрофагах и нарушения иммунной системы лёгких.

Диагноз на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований. Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидко­сти. Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от мо­лодых (6-8 недель) СПФ-поросят. Успех голландских учёных и объясняется прежде всего тем, что они использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 и К-6 оказа­лись не чувствительными для выделения возбудителя. Идентификацию возбудителя проводят по физико-химическими серологическим свойствам. Из серологических методов используют вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА В США для идентификации возбудителя использовали РН, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова. Во Франции разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических AT.Сероконверсия в ди­агностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му да после экспериментального инфицирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до 1:1280. Разработана методика очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре клеток МАРС-145 и FL.Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балласт­ных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаж­дением ПЭГ мол м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (7000 мин-1 в течение 6 ч). В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз. Очистка составляла 96,5%. Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности в ИФА. Высоко специфичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготов­ления AT диагностикумов для ИФА. Метод непрямой ИФА более простой и его можно использовать в полевых условиях.Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток, (лучше парных), чтобы суверенностью поставить лабораторный диагноз.

В Англии практикуется сбор из 12-15 пар сывороток от подозреваемого стада. Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г. Исследовано уже 118 стад и было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС. При серологиче­ском исследовании ложноположительные реакции, как правило,отсутствуют, хотя ложноотрицательные являются обычными и достигают 25%. Benfieldet. al. (1992) сообщали об ис­пользовании монАТ в ИФ при идентификации европейских, американских и канадских штаммов возбудителя РРСС. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагно­стики РРСС, составлены наборы диагностикумов для выявления РРСС и специфических AT. МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса РРСС в патологическом материале,так и для определения AT в сыворотках крови свиней, так как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ.

При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления. Ис­ключают прежде всего АЧС, КЧС, БА, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ, лептоспироз и хламидиоз. Характерной особенностью этой болезни является обострение вто­ричных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркули­ровать в пораженных стадах свиней. Это ещё более усложняет проведение лабораторной дифференциальной диагностики.

Иммунитет. После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному инфицированию. AT к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение го­да. При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профилактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса. Так выдан патент ЕРА 95200877.9 Akzo Nobel(Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного рес­пираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин. О механизме разви­тия иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.

Меры борьбы. Специфических средств лечения при РРСС нет. Отсутствуют также сред­ства специфической профилактики. Лабораторная диагностика болезни затруднена преж­де всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагности­ческих исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране не­обходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вы­воз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления. Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудован­ных транспортных средствах. Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать. Убирать, дезинфицировать помещения и места опороса свиноматок.Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе свиноводческих помещений.

Ветеринарно – санитарная оценка продукции в нашей стране не разработана.